hakkında şirket haberleri Yanlış olanı almayın, PIPES ve HEPES tamponları çok farklı.

Biyokimyasal deneylerde ve hücre kültürlerinde, uygun tamponun seçilmesi, deneyin doğruluğunu ve istikrarını sağlamak için önemli adımlardan biridir.N'-bis (((2-etanesülfonik asit)) ve HEPES (4-(2-hidroksieetil)-1-piperazinetanesulfonik asit) yaygın olarak kullanılan iki tamponHepsi çözeltinin pH'sını ayarlamakta önemli bir rol oynamasına rağmen, özellikleri, uygulama senaryoları ve önlemleri oldukça farklıdır.Aşağıda, bilimsel araştırmacıların ve laboratuvar teknisyenlerinin bu iki tamponu doğru bir şekilde seçmelerine ve kullanmalarına yardımcı olmak için PIPES ve HEPES arasındaki önemli farklılıkların ayrıntılı bir analizi verilmiştir..

一. PIPES ve HEPES'in kimyasal özellikleri ve çözünürlüğü
 

1. HEPES
 

(1) Kimyasal özellikler: HEPES, moleküler yapısında amino ve sulfonik asit grupları içeren bir zwitteriyon tamponudur.Bu, hidrojen iyon konsantrasyonundaki değişiklikleri geniş bir pH aralığında tamponlamasını sağlar (6.8-8.2) ve çözeltinin pH'sının istikrarını korur.
 

(2) Çözünürlük: HEPES suda oldukça çözünür, bu da ek çözünme adımlarına gerek kalmadan çeşitli biyokimyasal deneysel sistemlerde kolayca kullanılmasını sağlar.

2. borular
 

(1) Kimyasal özellikler: PIPES, HEPES'ten biraz daha dar bir pH tampon aralığı olan ideal bir tampondur, 6.1-7.5Moleküler yapısında bulunan piperazine halka ve sülfonik asit grupları, belirli koşullar altında pH tamponlama yeteneğini verir.
 

(2) çözünürlük: HEPES'in aksine, PIPES'in kendisi suda çözünmez, ancak NaOH su çözeltisinde çözünür.ve çözünürlük özellikleri gerçek deneylerde dikkate alınmalıdır..

2Uygulama senaryoları ve PIPES ve HEPES arasındaki işlevsel farklılıklar
 

1HEPES uygulaması
 

(1) Hücre kültürü: HEPES, hücreler için toksik olmadığı ve normal biyokimyasal reaksiyonlara müdahale etmediği için çeşitli organizma türlerinin hücre kültürü ortamlarında yaygın olarak kullanılır.Özellikle sabit bir pH değerinin korunması için uzun bir süre gerektiren deneysel sistemlerde.
 

(2) Protein ve enzim araştırması: Protein istikrarı araştırmasında, HEPES genellikle bir tampon olarak kullanılır, çünkü çözeltinin pH'sını uzun süre sabit tutabilir.proteinin yapısını ve işlevini korumaya yararlı olanAynı zamanda, son derece uçucu ve pH duyarlı proteinler ve enzimlerin araştırılmasında da kullanılır.
 

(3) Moleküler biyoloji: DNA/RNA ekstraksiyonunda, PCR teşhis kitlerinde ve biyokimyasal teşhis kitlerinde, HEPES deney sırasında pH'nın istikrarını sağlamak için önemli bir tampon bileşenidir.
 

2. Tüplerin uygulanması
 

(1) Protein arıtma: PIPES'in protein arıtma alanında özel uygulamalar vardır.fosfosellüloz kromatografisi kullanılarak tubulinin arıtılması ve gel filtreleme yoluyla rekombinan GTP bağlayıcı proteinlerin ARF1 ve ARF2 arıtılması gibi.Çoğu metal iyonuyla istikrarlı kompleksler oluşturmamasının özelliği, metal iyonları içeren çözeltme sistemlerinde iyi çalışmasını sağlar.
 

(2) Kromatografik analiz: Kation değişim kromatografisinde, PIPES sıklıkla bağlayıcı tampon veya eluansın bir bileşeni olarak kullanılır.Ancak aşırı iyonik kuvvet veya pKa değerindeki değişikliklerden kaynaklanan deneysel hatalardan kaçınmak için konsantrasyonunun sıkı bir şekilde kontrol edilmesi gerekir..
 

(3) Özel biyokimyasal deneyler: PIPES'in uygulama alanı nispeten dar olmasına rağmen, bazı özel deneylerde tampon olarak yenilmez bir rol oynar.Kalsiyum fosfat ve DNA yağmalama sistemi gibi, AFM ve elektroporasyon deneyleri.

III. PIPES ve HEPES tamponlarının kullanımı için önlemler
 

1HEPES için önlemler
 

(1) Interferans: HEPES çoğu durumda biyokimyasal süreçlere müdahale etmese de, DNA ve kısıtlama enzimleri arasındaki reaksiyonu etkilemektedir.Bu nedenle DNA enzim kesimini doğru bir şekilde kontrol etmeyi gerektiren deneyler için uygun değildir.Aynı zamanda, belirleme sonuçlarının doğruluğunu etkileyebilecek protein içeriğini belirlemek için Lowry'nin yöntemi uygun değildir.
 

(2) Konsantrasyon seçimi: HEPES kullanılırken, deneysel gereksinimlere göre uygun konsantrasyon seçilmelidir.Yeterli tamponlama kapasitesine ulaşmak için kültür ortamı genellikle 20mmol/L HEPES içerir..
 

2. Tüpler için önlemler
 

(1) Çözünürlük: PIPES'i kullanmadan önce, çözülmemiş parçacıkların deneyde müdahale etmemesi için NaOH su çözeltisinde tamamen çözüldüğünden emin olun.
 

(2) Serbest radikal oluşumu: PIPES serbest radikaller oluşturabilir, bu nedenle redoks reaksiyonlarını önlemek gereken deneylerde kullanılmak için uygun değildir.
 

(3) Konsantrasyon bağımlılığı: PIPES'in pKa değeri konsantrasyon bağımlıdır ve iyonik kuvveti nispeten büyüktür.Konsantrasyon seçimine ve kontrolüne özel dikkat edilmelidir..