Tris Baz 77-86-1 Biyolojik Tampon Trometamol

Tris Base 77-86-1 Biyolojik tampon Trometamol

Tris tamponunun protein elektroforezinde ve Western Blotting'da kullanımları

Tris tamponları protein elektroforezi ve batı lekesi için ayrılmaz bir parçasıdır.Tüm ortak tamponlar önceden karıştırılmıştır.Ya da kendi Tris tamponunuzu yapmayı tercih ederseniz, arıtılmış Tris tozu, glisin ve diğer moleküler biyoloji derecesi tampon reaktifleri ile başlayabilirsiniz.

Çoğu SDS jeli keskin bir Tris tampon sistemi kullanır. Büyük peptitlerin kolayca geçebilmesi için büyük gözeneklere sahip yığma jeli genellikle pH 6.7?? 6'da formüle edilir.8Bu pH'da, iyonize klorür iyonları hızla göç ederek pH'ları yükseltir ve düşük iletkenlik alanına sahip bir voltaj eğimi yaratır.Bu da glisinin (çalışan tampondan) klorür cephesinin arkasında iyonlaşmasına ve göç etmesine neden olur.Bağlı SDS nedeniyle negatif yüklü olan numune içindeki çoğu peptid, klorür ve glisin arasında göç ederek dar bir bant oluşturur ve böylece "yığılır".

Yığın, daha yüksek bir pH'da olan (tipik olarak pH 8,7 ̇ 8,8) çözme jeli'ne ulaştığında, glisinin artan iyonlaşmasının hızlanmasına ve peptitleri geçmesine neden olur.çözme jelinin daha küçük gözenek boyutu bir tarama etkisi göstermeye başlar., bu da peptitlerin boyutlarına göre ayrılması ile sonuçlanır.

Çoğu Batılı lekelenme protokolü, protein aktarımı için düşük iyonik kuvvetli bir Tris tamponu kullanır.

Tris tamponunun nükleik asit agaroz elektroforezinde kullanımı

Tris tamponları DNA agarose elektroforesi için yaygın olarak kullanılır.Farklı DNA formlarının çözünürlüğünde ve elektroforez sırasında hareketliliklerinde bazı farklılıklar olmasına rağmenTBE'deki borat iyonları birçok enzimi inhibe eder.Bazı enzim aracılığıyla aşağıda yapılan manipülasyonlar işe yaramayabilir.Bu nedenle, TAE tamponu çoğu DNA laboratuvarında günlük kullanım için tercih edilir.

Bir Tris tamponu yapmak

Tris tamponu, çoğu biyolojik sistem için iyi bir seçimdir, çünkü 25 °C'de yaklaşık 8.1 pKa'sına sahiptir ve bu da pH aralığında etkili bir tampon haline getirir.Bu pH aralığı çoğu biyolojik işlem için uygundur.Tris tozu ayrıca HEPES gibi daha özel tamponlardan daha ucuz ve daha dayanıklıdır.

Tris tampon çözeltisi yapmak için iki yol vardır. biri Tris baz ve Tris HCl çözeltisi yapmak, her ikisi de istenen konsantrasyonda,ve sonra doğru pH alınana kadar pH'yu izlerken bir çözeltinin (genellikle Tris HCl) aliquotlarını diğerine (genellikle Tris baz) ekleyin.Pratikte, bu çok nadiren yapılır.

Genellikle kullanılan Tris tamponlarının çoğunun yapımı için kullanılan yöntem sadece Tris bazıyla başlamaktır. Uygun miktarda Tris tozu suda çözülür, pH HCl ile ayarlanır,ve sonra tampon istenen hacimde yapılır. pH ayarlanırken aşırılık olmadığını varsayarsak, bu yöntem iyonik kuvveti değiştirmez.veya Tris HCl kullanarak ve pH'u NaOH ile ayarlayarakTris tamponunun amaçlanan kullanımına bağlı olarak, bu tür bir değişiklik önemli olabilir veya olmayabilir.

Bir Tris tamponu yaparken, pH'yı ayarlarken Tris uyumlu bir elektrot kullanmak önemlidir.Tek bağlantılı Ag/AgCl elektrotları, Tris tamponlarıyla kullanıldığında istikrarsızlık gösterebilir, çünkü gümüş yavaş yavaş çöküyor ve elektrotu tıkar.Çift bağlantılı veya calomel referans elektrotlarının kullanımı, Tris tamponundaki doğru pH ölçümlerini sağlar.